ВРЕМЕННЫЕ МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ ПО ЛАБОРАТОРНОМУ ИССЛЕДОВАНИЮ НА ЛИСТЕРИОЗ СЕЛЬСКОХОЗЯЙСТВЕННЫХ ЖИВОТНЫХ — Страница 13

(Утверждено Главным управлением ветеринарии МСХ СССР 18 марта 1965 года)

1. Возбудитель листериоза (листерия моноцитогенес) представляет собой подвижную полиморфную (чаще палочковидную) бактерию длиной 0,5—2,0 микрона; она хорошо окрашивается всеми аниллиновыми красками, грамположительна (в старых культурах могут встречаться грамотрицательные палочки). Хорошо растет при температуре 37°С на обычных питательных средах (рН=7,2—7,4). обычно приготовленных на мар-теновском бульоне, а также на печеночных средах с добавлением 1% глюкозы и 2—3% глицерина. Характерным для роста возбудителя листериоза является легкое помутнение бульона и появление мелких росинчатых колоний на агаре.

2. Материалом для исследования служат: целый труп животного или голова, головной мозг, паренхиматозные органы; абортированный плод; при наличии маститов — молоко из пораженных долей вымени.

3. Исследование на листериоз проводят следующим образом:

а) вскрывают труп животного и обязательно черепную полость; из мозга и паренхиматозных органов делают обильные, множественные посевы, на обычные или обогащенные питательные среды (агар, бульон), из тех же органов готовят суспензию для заражения опытных животных и мазки отпечатки, которые окрашивают по Граму; при исследовании абортированного плода дополнительно делают посевы из содержимого желудка. Посевы помещают в термостат при температуре 37°С;

б) на второй—третий день посевы просматривают на чистоту и типичность роста. Из чистых культур готовят мазки и окрашивают их по Граму, делают пересев на те же питательные среды и 6—12-часовую культуру, выращенную при комнатной температуре (22°С), исследуют на подвижность методом висячей капли.

Чистую культуру пересевают на сокращенный пестрый ряд (глюкоза, рамноза, салицин, дульцит, инулин и сорбит); глюкоза, рамноза, салицин разлагаются с образованием кислоты (без газа), дульцит, инулин и сорбит не разлагаются.

При отсутствии роста на питательных средах в первые дни наблюдение за посевами продолжают в течение двух недель. При смешанном росте делают отбор наиболее характерных колоний и пересев их. Смешанные культуры можно очистить также путем заражения молодых белых мышей.

4. Специфические свойства возбудителя листериоза проверяют коньюнктивальной пробой на морских свинках и в реакции агглютинации со стандартной листериозной сывороткой. Антигеном, для реакции агглютинации служит суспензия суточной агаровой культуры на физиологическом растворе. Реакцию ставят на стекле с сывороткой в разведении 1:50.

Коньюнктивальную пробу осуществляют путем нанесения на коньюнктиву глаза морской свинки 2 капель испытуемой культуры с последующим легким массажем век ватным тампоном. Бирулентные штаммы листерий на 2—4 день вызывают у морской свинки гнойный кератоконьюнктивит.

Биологическая проба на листериоз ставится на белых мышах и морских свинках. Под опыт берут 2—5 белых мышей (весом 18 граммов) или двух морских свинок. Суспензию тканей внутренних органов или бульонную культуру вводят животным под кожу в дозе 0,3—0,5 мл. Для повышения эффективности биопробы белым мышам за 3—4 часа до заражения инъецируют внутримышечно кортизон в дозе 5 мг. При положительной биопробе животные погибают через 2—6 суток после заражения. При вскрытии отмечают множественные некротические очажки в печени, селезенке, почках. В отдельных случаях этих поражений может не быть. Из внутренних органов павших животных делают высевы на питательные среды и мазки-отпечатки.

Срок наблюдения за подопытными животными 8 суток. 158

Для дифференциации возбудителя листериоза от возбудителя рожи свиней пользуются следующей таблицей.

Признаки Возбудитель листериоза Возбудитель рожи свиней Подвижность Подвижен в молодой 6—12-часовой культуре, выращенной при комнатной температуре Неподвижен Салицин Разлагает Не разлагает Сероводород Не образует Образует РА с позитивной сывороткой с листериозной + С листериозной