НАСТАВЛЕНИЕ по определению санитарного качества молока с помощью набора химических реактивов ЦНИЛ и ВНИИВС — Страница 17

(Утверждено Главным управлением ветеринарии Министерства сельского хозяйства СССР 10 декабря 1964 года)

1. Набор химических реактивов, предложенный ЦНИЛ-реактив и ВНИИВС, предназначается для:

а) определения эффективности пастеризации молока по реакции на пороксидазу с парафенилендиамином и йодистокалиевым крахмалом (1000 анализов) и по реакции на фосфатазу с фенолфталеинфосфатом натрия (100 анализов);

б) определения свежести молока по его кислотности (1000 анализов);

в) определения качества молока но редуктазной пробе с метиленовым синим (1000 анализов) или резазурином (500 анализов);

г) для исследования молока, полученного от животных, подозреваемых по заболеванию маститом, по реакции с бромтимоловым синим (1000 анализов) или с димастином (1000 анализов).

2. В состав набора входят следующие реактивы:

Бромтимоловый синий инд — 2.5 г Димастин (изготовляется ВНИИВС)   — 100 г Калий йодистый чда — 10 г Крахмал растворимый ч — 10 г Лимонная кислота чда — 5 г Метиленовый голубой (фиксанал) хч — 5 ампул Натрий едкий хч — 10 г Натрий фенолфталеинфосфат (в буферной смеси)   — 100 г Натрий фосфорнокислый однозамешенный чда — 250 г Пергидроль 30-процентный мед — 10 г Резазурин (импорт)   — 10 таб. Соляная кислота (0.1-процентный раствор (фиксанал)   — 1 амп. П-фенилендиамин солянокислый чда — 5 г Фенофталин инд — 1,5 г Хлороформ чда — 10 г

В набор входит также таблица ВНИИВС для определения чистоты молока.

3. Для проведения указанных анализов необходимо иметь:

• Колбы мерные на 100. 200 и 500 мл.
• Колбы конические на 150—20О мл.
• Пробирки из бесцветного стекла с пробками.
• Пипетки на 5—10 мл градуированные с делением 0.1 мл
• Бюретки со стеклянным краном.
• Капельницы.
• Пипетку-автомат (клювик) на 1 мл.
• Чашки фарфоровые.
• Водяную баню или термостат.
• Молочно-контрольные пластинки.
• Пипетки измерительные на 1, 2, 5, 10 и 20 мл.

Кроме того, для приготовления растворов бромтимолового синего и фенолфталеина необходим этиловый спирт.

I. ОПРЕДЕЛЕНИЕ ЭФФЕКТИВНОСТИ ПАСТЕРИЗАЦИИ МОЛОКА

4. а) Реакция на пероксидазу с йодистокалиевым крахмалом. Этот метод основан на способности пероксидазы легко разлагать перекись водорода с выделением активного кислорода, который окисляет йодистый калий выделением свободного йода, а последний окрашивает крахмал в синий цвет.

Для проведения анализа готовят растворы йодисто-калиевого крахмала и 0,5-процентчый раствор перекиси водорода.

Для получения раствора йодистокалиевого крахмала 3 г. крахмала смешивают с небольшим количеством холодной воды. Затем в отдельной колбе доводят до кипения 100 мл воды и при непрерывном помешивании, чтобы не образовалось комков, приливают ее к разведенному крахмалу. Полученный раствор доводят до кипения и после охлаждения к нему добавляют 3 г йодистого калия.

Раствор нестойкий, и его следует готовить в небольшом количестве; хранить в темном, прохладном месте.

Для получения 0,5-процентного раствора перекиси водорода, к 0,5 мл пергидроля добавляют 30 мл дистиллированной воды, раствор пригоден для использования в течение месяца: должен храниться в склянке из оранжевого стекла.

Техника исследования

В пробирку наливают 5 мл исследуемого молока, затем 5 капель раствора йодистокалиевого крахмала и 5 капель 0,5%-ной перекиси водорода. Содержимое пробирки тщательно перемешивают.

Результат: если молоко пастеризовано правильно, цвет его в пробирке не изменяется. Если молоко пастеризовано с нарушением режима или пастеризовано правильно, но затем к нему добавлено сырое молоко, в испытуемой пробе быстро появляется темно-синяя окраска, как и в пробе сырого молока.

Изменение окраски в исследуемых пробах, наступающее позже 2 минут, не учитывается, так как она может явиться следствием разложения реактива.

При применении растворов крахмала и йодистого калия раздельно, а не в виде одного реактива, как указано выше, испытание следует проводить так: в пробирку отмеривают 5 мл исследуемого молока, затем приливают 0,5 мл 1-процентного раствора крахмала, 2 капли 10-процентного раствора йодистого калия и 5 капель 0;5-процентного раствора перекиси водорода. Далее поступают так же, как описано выше.

Реакцией с йодистокалиевым крахмалом можно установить примесь сырого молока к пастеризованному в количестве от 5%;

б) реакция на пероксидазу с солянокислым парафенилендиамином. Для проведения анализа готовят 2-процентный водный раствор солянокислого пара-фенилендиамина и буферную смесь. Для получения первого раствора — 2,5 г солянокислого пара-фенилендиамина растворяют в 125 мл дистиллированной воды Раствор нестойкий; хранить в склянке из оранжевого стекла с притертой пробкой.

Для приготовления буферной смеси берут 43, 25 г однозамещенного фосфорнокислого натрия и 0,65 г кристаллической лимонной кислоты, растворяют в небольшом количестве дистиллированной воды, а затем объем доводят до 500 мл. Срок годности раствора — 1 месяц.

Техника исследования

В пробирку наливают 5 мл исследуемого молока и 2,5 мл буферной смеси, перемешивают и помещают пробирку в водяную баню при 35° на 3—5 минут. Затем к исследуемой пробе добавляют 6 капель 0.5-процентного раствора перекиси водорода и 3 капли 2-процентного раствора солянокислого парафенилендиамина, пробирку снова ставят в водяную баню при том же режиме и наблюдают за изменением окраски.

Результат: если молоко пастеризовано правильно и после этого не добавлялось сырого молока, изменения окраски не наступает; в противном случае появляется темно-синее окрашивание.

в) Реакция на фосфатазу с фенолфталеинфосфатом натрия.

Эта реакция является более чувствительной при определении качества пастеризации молока, сливок и кисломолочных продуктов. Метод исследования основан на обнаружении в сыром молоке фермента фосфатазы, который полностью разрушается при нагревании молока до 63°_в течение 30 минут. При более высокой температуре (76° и выше) фермент разрушается почти моментально. Пpи добавлении к сырому молоку фенолфталеинфосфата натрия, фосфатаза отщепляет от него фосфат и освобождает фенолфталеин, который в щелочной среде дает красное окрашивание, что указывает на присутствие в молоке фосфатазы.

Техника исследования

В пробирку наливают 2 мл исследуемого молока и добавляют 1 мл 0,1-процентного раствора реактива фенолфталеин-фосфата натрия. Пробирку закрывают пробкой и после тщательного перемешивания содержимого ее помещают в водяную баню при температуре 40-45°. Реакцию учитывают через 10 минут и через один час.

Результат: если молоко пастеризовано (фосфатаза инактивирована) в исследуемой пробе никаких изменений не наблюдается. При нарушении режима пастеризации или добавлении сырого молока — наблюдается изменение окраски от светло-розовой до ярко-розовой:

Реакция на фосфатазу можно установить добавление сырого молока к пастеризованному в количестве не менее 2%.

Этой же реакцией можно определить качество пастеризации и других молочных продуктов. Для исследования необходимо взять следующее количество исследуемого продукта и реактивов:

  Количество   продукта воды (МЛ) децинормального раствора едкого натрия (мл) раствора фенолфталеинфосфата натрия (МЛ) Сливки 2 мл 2 — 1 Кисломолочные продукты 2 мл 2 — 2 Сметана 2 г 2 — 2 Творог, паста ацидофильная 2 г — 4 2

II. ОПРЕДЕЛЕНИЕ СВЕЖЕСТИ МОЛОКА ПО КИСЛОТНОСТИ

5. Кислотность молока (в градусах Тернера — Т°) определяется титрованием едким натром по. фенолфталеину.

Для проведения анализа готовят децинормальный раствор едкого натра: 8 г химически чистого едкого натра растворяют в 2 л свежепрокипяченной дистиллированной воды и устанавливают его титр по соляной кислоте. Для этого в коническую колбу на 150 мл наливают 20 мл децинормального раствора соляной кислоты, добавляют три капли 1-процентного спиртового раствора фенолфталеина и титруют приготовленным раствором едкого натра до появления слабо-розового окрашивания, не исчезающего в течение 1 минуты.

Коэффициент поправки щелочи по соляной кислоте рассчитывают по формуле К=20Н где 20—объем децинормального раствора соляной кислоты, Н—объем раствора едкого натра, израсходованного на титрование.

Техника исследования

В коническую колбочку наливают 10 мл исследуемого молока, 20 мл дистиллированной воды (свежепрокипяченной и охлажденной до комнатной температуры) и три капли 1-процентного спиртового раствора фенолфталеина.

Содержимое колбочки тщательно перемешивают и из бюретки осторожно, по каплям, прибавляют децинормальный раствор едкого натра до появления слаборозового окрашивания, не исчезающего в течение минуты.

Результат: количество мл щелочи, пошедшей на титрование, умноженное на коэффициент поправки и на 10, и является показателем кислотности исследуемого молока в градусах Т°.

Можно проводить исследование и без добавления дистиллированной воды, но при этом полученный результат в градусах уменьшают на 2,5°.

III. ОПРЕДЕЛЕНИЕ СТЕПЕНИ БАКТЕРИАЛЬНОЙ ОСЕМЕНЕННОСТИ МОЛОКА ПО РЕДУКТАЗЕ

6. Реакция основана на восстановительном действии бактерий на метиленовый голубой или резазурин. (Реакция с резазурином протекает значительно быстрее, чем с метиленовым голубым),

а) Реакция с метиленовым голубым. Для постановки реакции готовят раствор из реактива фиксанал метиленовый голубой.

С пробирки с фиксаналом предварительно снимают этикетку, тщательно очищают ее и пробку от парафина и промывают наружную поверхность водой. Затем содержимое одной пробирки фиксанала переносят в мерную колбу емкостью 200 мл; пробирку и пробку промывают дистиллированной водой до тех пор, пока промывная вода, которая сливается в эту мерную колбу, не станет бесцветной. Посте этого водой доводят объем раствора в колбе до 200 мл и тщательно перемешивают.

Техника исследования

В стерильную пробирку наливают стерильными пипетками 1 мл рабочего раствора метиленового голубого и 20 мл исследуемого молока (сливок). Пробирку сразу же закрывают стерильной корковой или резиновой пробкой, жидкости смешивают и ставят пробирку в водяную баню (редуктазник) или термостат при Температуре 33—40°. При этом уровень воды в бане должен быть немного выше уровня молока в пробирке.

Момент смешивания молока с мети леновым голубым записывают, как начало испытания, а окончанием исследования считают момент, когда исследуемое молоко в пробирке примет белый цвет. Остающийся иногда в исследуемом молоке небольшой кольцеобразный окрашенный слой вверху или внизу пробирки в расчет нe принимается.

Наблюдение за изменением окраски молока отмечают через 20 минут, затем через 2 часа и через 5,5 часов.

Результат: степень бактериальной обсемененности молока и его качество определяются по скорости обесцвечивания исследуемых проб:

Продолжителыность обесцвечивания резазурина Цвет молока Качество молока Класс До 20 минут Белое Очень плохое IV Через 1 час Розовое (до (белого) Плохое III Через 1 час Сине-фиолетовое Удовлетворительное II Через 1 час Сине-стальное (без изменения первоначального цвета) Хорошее I

б) Реакция с резазурином. Для постановки реакции предварительно готовят раствор резазурина: 1 таблетку резазурина растворяют в 50 мл стерильной дистиллированной воды. Срок годности раствора 24 часа.

Техника исследования

В стерильную пробирку наливают 10 мл молока и 1 мл раствора резазурина. Смешивают и ставят ее в водяную баню при 37°—38°. Изменение состояния окраски учитывается через 20 минут и 1 час.

Результат: качество молока определяют с помощью прилагаемой к набору цветной таблицы, по состоянию окраски исследуемой пробы:

Скорость обесцвечивания Приблизительное количество бактерий в 1 мл молока Качество молока Клacc 20 минут и менее Более 20 млн. Очень плохое IV От 20 минут до 2 часов От 4 млн. до 20 млн. Плохое III От 2 часов до 5 часов 30 мин. От 500 тыс. до 4 млн. Удовлетворительное II Более 5 час. 30 мин. Менее 500 тысяч Хорошее I

Реакцией с резазурином можно исследовать молоко, хранившееся при температуре не выше 10° и не более 12 часов. При постановке реакции, после добавления к исследуемому молоку резазурина, пробы рекомендуется защищать от влияния света.

IV. ИССЛЕДОВАНИЕ МОЛОКА, ПОЛУЧЕННОГО ОТ ЖИВОТНЫХ, ПОДОЗРЕВАЕМЫХ ПО ЗАБОЛЕВАНИЮ МАСТИТОМ

7. С целью определения качества молока, которое подозревается, что оно получено от коров, больных маститом, его исследуют реактивом бромтимоловым синим или димастином.

а) Реакция с бромтимоловым синим. Для постановки реакции готовят раствор: 0,2 г реактива бром-тимоловый синий растворяют в 60 мл 95° спирта и затем добавляют 40 мл воды.

Техника исследования

Для исследования необходимо взять молоко непосредственно от коровы, подозреваемой по заболеванию маститом. К 5 мл исследуемого молока, взятого в фарфоровую чашечку, добавляют 1 мл раствора бром-тимоловый синий.

Результат: если молоко взято от коровы больной маститом, цвет молока изменяется от темно-зеленой до темно-синей окраски. Молоко от здоровых коров окрашивается в желто-зеленоватый цвет.

б) Реакция с димастином. Для постановки реакции готовят 10-процентный раствор димастина (10 г препарата растворяют в 100 мл дистиллированной воды комнатной температуры).

Техника исследования

Молоко исследуется от коров, подозрительных по заболеванию маститом.

В каждую луночку молочно-контрольной пластины из каждой доли вымени в отдельности выдаивается по 1 мл молока. Затем, также в каждую луночку, при помощи пипетки-автомата вливают по 1 мл 10-процентного раствора димастина и размешивают деревянной палочкой в течение 7—15 секунд.

Результат: молоко из больной доли вымени с реактивом образует железообразную массу. По плотности этой массы определяют степень поражения доли (от одного до четырех крестов). Одновременно изменяется и цвет смеси: оранжевый цвет со всеми оттенками получается, если молоко из здоровых долей вымени; красный, малиновый, алый, пунцовый — если молоко из долей вымени, пораженных маститом.

Молоко из здоровых долей вымени с раствором димастина желе не образует.

V. ТАБЛИЦА ВНИИВС ДЛЯ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ЧИСТОТЫ МОЛОКА

8. Для определения чистоты молока по механической загрязненности с помощью таблицы ВНИИВС, берут пробу молока (предварительно перемешанного в бидоне (ведре) в количестве 2,50 мл (охлажденное молоко следует подогревать до 35—40°) и фильтруют его через ватный фильтр с помощью прибора «Рекорд».

Фильтр, с остатками на нем механических частиц сравнивают с показателями таблицы, указывающей группу молока по загрязненности, соответствующему действующему ГОСТ 8218-56.